目的]研究四川省變電站RTV涂層絕緣層絕緣表面藻類的生長情況，并進行系統的分子分析。[方法]選擇四個典型的藻類生長地點，并在四個地點的RTV涂層絕緣體上生長的藻類進行采樣，并用顯微鏡初步鑒定其形態。
　　后將18S rDNA基因用于系統發育分析。[結果]通過顯微鏡觀察，發現4個部位的優勢藻是單細胞球狀藻。統發育分析表明，雅安藻類屬于渡邊分社，與盧氏小球藻密切相關，與MP，NJ和BI密切相關。上的支持率分別為86％，79％和1.0，最初被確定為Heterochlorella sp。SCYA1;廣安藻的物種屬于綠藻，而綠藻rt18S DNA序列的堿基沒有差異。國的支持率分別為97％，99％和1.0；因此，電纜證實了它們是藻類亞壁松球藻SCGA8。中和南充的這兩個藻類都屬于Scendesmus屬，兩者密切相關，其序列僅相距2個堿基。MP，NJ和BI樹的支持率相對較高，分別為93％，98％和1.0。們最初被標識為Scenedesmus sp.。SCBZ5和Scenedesmus sp。SCNC7。［結論］ 4個變電站RTV內襯絕緣子的優勢藻種類并非全都相同，四川省RTV內襯絕緣子上生長的藻類也很多樣化。資項目：四川省電力科學研究院項目（13H1138）；四川省科技廳項目（2014JY0171）。者簡介周炳兵（1990-），男，甘肅天水人，碩士，研究方向：藻類分類與資源利用。*通訊作者，副教授，從事藻類代謝和微藻類能量的研究。溫硫化硅橡膠（RTV）具有非常好的熱穩定性，電絕緣性，耐水性和耐水滲透性[1]。
　　被廣泛用作電氣系統中的防污染旁路材料。潮濕和嚴重污染的情況下，硅橡膠可以有效防止污染的爆發[2]。管硅橡膠作為抗污染的污染控制材料具有許多優點，但是硅橡膠絕緣子表面上的生物生長現象已經出現在許多領域。類是在硅橡膠絕緣子上發展的主要微生物，特別是在熱帶地區[3]。爾南多等。[4]報道了在斯里蘭卡和坦桑尼亞的33 kV輸電和處理設施中，RTV隔離器上藻類的生長，主要是在絕緣子表面。斯里蘭卡的有機硅隔熱材料中分離出的藻類物種已被確定為小綠藻（Chlorella zonfingensis Dnz），主要分布在亞洲，澳大利亞和歐洲，通常生長在樹干，巖石上和建筑物的墻壁。坦桑尼亞的硅橡膠絕緣層中分離出的綠藻被確認為Apatococcus constipatus，屬于Chaetophraceae科和Leptosiroideae科，這是一種僅存在于非洲的藻類[ 5]。新奧爾良西部的濕地中，在不同類型的隔離層上也發現了藻類和苔蘚等生物的生長[6]。德國，Kunde等人。[7]觀察了使用藻類和真菌的有機硅橡膠絕緣子在使用了7年后的生長情況，這些微生物主要分布在絕緣子的下部和腰部雨傘的上邊緣。緣子。行5年后，在日本米澤試驗場的聚合物硅橡膠絕緣子上也觀察到了藻類的生長，這些藻類存在于分隔絕緣子的墊片和套管中[8]。9]。Sakata等人[10]將在絕緣子表面生長的藻類鑒定為葉球菌。Dernfalk [11]還發現，在瑞典運行了12年的11 kV配電系統中，老化的硅橡膠絕緣層受到了嚴重的生物污染。些硅橡膠絕緣子的部分表面覆蓋有綠藻，部分表面覆蓋有地衣。
　　生物污染的絕緣表面相對粗糙，藻類和地衣主要分布在絕緣子上的葉子中[12]。前，國外已經對絕緣子上的藻類生長進行了廣泛的研究。們發現它們的生長會影響絕緣子的特性[13-16]，這可能會導致繞過污染，進而影響電路的正常運行。國地域遼闊，自然環境豐富多樣，但關于中國輸變電設備中硅橡膠隔離器藻類生長的報道很少。四川省進行的調查表明，硅橡膠絕緣子上藻類的生長是普遍的。
　　擇了四個典型區域：雅安市，廣安市，巴中市和南充市。集，分離和純化了在這四個變電站中生長的RTV涂層隔離劑和藻類，并分析了這四個藻類的18S rDNA基因。隆和分子系統學的研究初步確定了這四種藻類的分類學地位，并為進一步研究提供了理論基礎。2012年，從雅安220 kV Caoba變電站的RTV絕緣，同安（廣安）220 kV變電站的RTV絕緣中收集了藻類。a），巴中市信義變電站110 kV的RTV絕緣和應山縣應山縣的110 kV RTV絕緣。表面上，在采樣過程中，選擇4厘米×4厘米的樣品，用勺子刮去海藻層，將其收集在無菌離心管中，然后將其培養。類收集在無菌BG11培養基中的各個位置[17]。養條件：溫度22，光照強度3000 lx，明暗時段12 h [DK]：12 h。態觀察：在每個位置取30μL紫菜液制成水封，在Olympus BH2顯微鏡下觀察它們，在千分尺下測量細胞大小，并在Toup View模式下拍照。
　　類物種的分離和純化：將適量的藻類液培養約14天，并在血細胞計數板下計算細胞密度，然后稀釋至不同的梯度，優勢藻已通過涂層板法純化[18]。用CTAB方法[19]從地下藻類中提取總DNA，并使用紫外可見TU分光光度計測量DNA濃度。-1810（北京通用分析儀器有限公司，通用儀器）并儲存在-20°C直至使用。用已知綠藻的18S rDNA基因序列，ClustalX 1.83 [20]軟件進行多重序列比對（多重比對），選擇保守區域并使用Primer Premier 5.0軟件[21]設計引物，并獲得1對引物：18S5F（5-AGGCCTACCATGGTGGTAACGG-3）; 18S7R（5-CCAGAACATCTAAGGGCATCAC-3）。PCR反應系統為25.00μL，包含2.50μL的10X緩沖液，0.15μL的Taq DNA聚合酶（Vazyme，南京），2.50μL的dNTP（2.5 mmol / L）。及上游和下游引物。個1.00μL，2.00μLDNA模板代表約50 ng和15.85μL雙蒸餾水。PCR反應程序在94°C下預變性5分鐘，然后執行34個循環，每個循環包括在94°C變性30秒，在49°C退火30秒并在72°C延伸。°C持續90秒，完成后，轉化72°C持續10分鐘。用SanPrep柱凝膠回收試劑盒（上海Sangon）純化PCR產物，并連接至pMD19-T載體（TaKaRa，大連有限公司）。連接產物轉化到感受態大腸桿菌DH5α細胞（美國，Invitrogen）中，并通過菌落PCR鑒定出陽性克隆，并將陽性克隆發送至華大基因技術有限公司。行測序。GenBank數據庫下載了一系列18S rDNA基因序列（表1）。GenBank數據庫獲得的已知綠藻的18S rDNA基因序列和克隆的4種藻類的18S rDNA基因序列被用于建立了綠藻的數據庫。用ClustalX 1.83 [20]比對和多序列比對對構建基因的序列分析和數據序列進行分析，在此基礎上進行了分子系統學分析。葉斯系統（BI）分析。用MrBayes v3.1.2 [22]軟件，首先對數據進行模型和參數估計，然后根據以下準則選擇最佳的基本替代模型：赤池信息準則（AIC）[23]。
　　兩個并行程序使用4個通道（Markov鏈，Monte Carlo鏈，MCMC）覆蓋了20，000，000代，并且為100代保留了一棵樹。1000代獲得的樣本樹的前20％被作為老化樣本丟棄，樣本中的其余樹采用50％多數一致性原理構建共識樹。后，通過后驗概率（PP）評估進化樹拓撲的可靠性。居連接系統（NJ）分析方法。用MEGA v.6.0 [24]軟件和Kimura-2參數[25]遺傳距離模型，對系統進化樹的拓撲結構進行了測試，以通過自舉方法（Bootstrap， BS）。1000.最大簡約系統（MP）的分析。析使用軟件PAUP * 4.0 beta 10 [26]，具有樹重新連接以進行分支長度轉換，啟發式搜索1000個隨機加法重復（Random Addition），樹選擇（選項MulTrees） ）獲取分支樹。樣，自檢方法用于測量進化樹拓撲的置信度。上所有方法均使用假單胞菌葡萄孢菌，嗜鹽果蠅和外部嗜鹽球菌作為外部基團。1顯示，在4個站的每個站中，藻類都生長在RTV涂層隔熱層的大傘和小傘的上表面。類主要在大傘的外表面上生長，該傘未被小傘阻擋，除非雨水通過（圖1B中的箭頭除外），藻類的分布更均勻，絕緣子小傘上藻類的生長較少，主要在小傘上表面的外緣分布不均勻，呈碎片狀。光，在不容易附著在水和灰塵上的大小絕緣子的表面上都不會生長藻類。頂部到底部，絕緣子表面的藻類生長逐漸增加。該實驗中分離出的四種優勢藻種分別命名為SCYA1（雅安藻類），SCGA8（廣安藻類），SCBZ5（巴忠藻類）和SCNC7（藻類）。充藻類），取決于采樣點。SCYA1（圖2A）是4.0至90μm的單細胞綠球藻;成熟細胞的葉綠體杯為1或2個，幼蟲細胞的葉綠體通常為紡錘形，沒有明顯的蛋白核；沒有鞭毛，沒有鞭毛，可以進行液體鍛煉。SCYA1的形態特征與雜菌相似。SCGA8（圖2B）是單個細胞，有時將許多細胞臨時分組在一起，這些細胞是球形的，大小為4.5至13.0μm。綠體呈軸狀和星形，充滿整個細胞，沒有明顯的蛋白核。鞭毛，液體環境。養繁殖是細胞分裂，分裂表面或多或少垂直于其主軸。

　　SCGA8的形態特征與Synechococcus家族的Elchlortochloris相似。SCBZ5（圖2C）和SCNC7（圖2D）是5.5至11.0μm和5.0至11.0μm細胞的單細胞球體。綠體薄片，周細胞，一個具有蛋白質核心，細胞壁光滑，無刺：無鞭毛，在液體環境中不能移動，每個細胞在無性繁殖過程中產生兩個橢球形的孢子，并且子細胞在母細胞壁破裂后被釋放，未觀察到有性生殖。SCBZ5和SCNC7的形態學特征與景物屬的球形藻相似。于難以在光學顯微鏡下觀察到更詳細的特征，因此上述藻類的分類位置不能通過形態特征來確定。PCR擴增4種藻類的18S rDNA基因序列為1078 bp。表1的每種藻類的18S rDNA基因進行多序列比對后，最終比對序列的總長度為1031 bp。18S rDNA基因序列矩陣包含213個突變位點和163個簡約信息位點，分別占位點總數的20.66％和15.81％。T，C，A和G的平均堿含量分別為25.1％，20.6％，25.1％和29.2％。

　　G C含量（49.8％）基本等于A T含量（50.2％）。SCYA1測序的藻類物種的18S rDNA基因的序列與Heterochlorella luteoviridis，Cloroidium saccharophilum，Chloroidium ellipsoideum，Watanabea reniformis連鎖，而Viridella fridericiana的相同基因序列之間的相似性達到96.29％，94.81％， SCGA8藻類rDNA和Elliptochloris subsphaerica，Elliptochloris reniformis的18S基因的基因序列分別為94.63％，94.25％和93.80％。Elliptochloris bilobata相同的基因序列之間的相似度分別為100％，99.32％和99.16％，電纜SCBZ5和SCNC7藻類的18S rDNA基因序列之間的相似度為99.81％。僅存在兩個基本差異，與場景生物不同98.88％，98.88％和98.70％，98.70％和98.51％。種高度的相似性證實了形態學鑒定的結果。過MP，NJ和BI方法構建的系統發育樹的拓撲結構基本相同，如圖3所示。安變電站RTV隔離器上存在的藻類為位于系統發育樹Watanabea分支上，與luteoviridis的小球藻分組，MP，NJ和BI樹的支持率較高。以分別將高，86％，79％，1.0鑒定為小球藻屬的藻類，最初鑒定為雜藻菌SCYA1。

　　自廣安的RTV隔離器中存在的藻類物種位于Elliptochloris屬的分支中，并且與Elliptochloris subsphaerica的堿基有關。MP，NJ和BI樹的基準和支持率沒有差異，分別為97％，99％和1.0。類次氯酸鱗球菌SCGA8。中和南充變電站RTV涂層絕緣子上的藻類位于系統樹的phyphyphyta分支中，兩者密切相關，MP，NJ和BI樹中的支持率相對較高分別為93％，98％和98％。1.0。兩個藻類可以識別為Scenedesmus sp.。確定為Scenedesmus sp.。SCBZ5和Scenedesmus sp。別為SCNC7。
　　這項研究中，傳統方法被用于分離和鑒定，現代分子生物學方法被用于分析四種藻類，這在很大程度上確保了結果的準確性和客觀性。果。微鏡觀察發現，雅安市220 kV Caoba變電站，廣安市220 kV通寶變電站RTV涂層絕緣上的優勢藻種南充應山縣的110 kV變電站與巴中市信義110 kV變電站不同，但在光學顯微鏡下很難確定這種藻類分類的種類位置。18S rDNA基因構建的系統發育樹表明，這些不同的藻類不相同，屬于不同的類別。Heterochlorella sp.SCYA1是Coccodia屬，Watanabe分支和Chlorella屬的一種。南芥（Elliptochloris subsphaerica）SCGA8是擬南芥Microthamniales屬和Scendesmus sp。一種。SCBZ5和Scenedesmus sp。于綠藻科，Cyclottera，Scenedesmus。外在硅橡膠絕緣子上生長的藻類分別是小球藻Chonella zonfingensis Dnz，孔形鏈球菌Apatococcus constipatus和球狀鏈球菌Apatococcus lobatus。18S DNA序列外，除其他藻類物種外均可用，相同。統發育樹的構建并判斷這兩種藻類是否與該物種的分類狀態兼容在這項研究中的藻類。學家Gubanski等人發現，發現小球藻zonfingensis Dnz不屬于小球藻科。[5]，但藻類屬于綠藻類，并且與景物屬（BI，NJ和MP）密切相關。（支持率分別為1.0、99％和99％）。年來，Fucíkov和他的同事[27]根據藻類的分子和形態特征對其進行了重新定義，并將其分類為細胞藻類和綠球菌。與本研究構建的系統發育樹中的藻類物種分類學狀況一致。Sakata等人[10]確定葉球菌是小球藻，小球藻科和假單胞菌屬的成員。構建的系統發育樹中發現，藻類屬于小球藻屬，但不屬于小球藻科，而是獨立于小球藻科并形成自己的分支。以看出，可以在硅橡膠絕緣層上生長的藻類不是一個單一的物種，但是藻類的類型在不同的地方是不同的。中國四川變電站的絕緣子上生長的藻類是不同的。絕緣子上生長的藻類種類繁多。類是一種具有光能的自養生物，可以利用CO2作為碳源來合成有機物質，從而使藻類細胞得以生長和繁殖。時，光，溫度，鹽度和水也是藻類生長和繁殖過程中必不可少的生態因素。報告的硅藻橡膠絕緣子表面上藻類生長的區域中，絕大多數發現于熱帶和亞熱帶地區[3-12]，在雅安，廣安，南充和巴中研究的地點都在亞熱帶濕潤季風氣候區。年氣候宜人，極端天氣事件較少發生[28-31]。些區域中的光和溫度可以響應自然界中藻類的生長，空氣的濕度已成為限制絕緣子上藻類生長的主要因素。橡膠的表面張力非常低，并且材料表面上的水滴形成的靜態接觸角很大[32-34]。涂測試表明，水形成了水滴RTV硅橡膠襯里表面上分離的水，而不是連續的水膜。使水在RTV涂層的表面上形成點狀聚集體，從而減少了水的蒸發表面，為藻類的生長提供了潮濕的環境，并為藻類提供了所需的無機鹽。長。陶瓷或玻璃材料相比，RTV硅橡膠具有較低的導熱性和更好的隔熱性[35-37]。于外部溫度的變化和持續的陽光照射，RTV硅橡膠的溫度不容易發生根本變化，這會減慢絕緣子表面的水分蒸發和為藻類創造一個相對合適的生長環境。4個位置的RTV涂料絕緣子上藻類的生長和分布上，可以看出在小型背光傘的底面上沒有藻類的生長，大型絕緣子難以捕獲濕氣，大傘的上表面幾乎沒有被小傘擋住。類的生長表明光合作用是藻類生長的基礎。的強度和藻類所接觸的水量極大地影響了它們的光合作用效率。外，藻類具有非常強的生命力，并且由于在不利的環境中自動代謝或產生孢子而可以在不利的環境中生存。果條件允許，它們還可以恢復生長，并迅速繁殖以形成新的藻類菌落。于上述因素，可以得出結論，野生型RTV絕緣子表面藻類的生長是不可避免的結果，藻類的生長要比陶瓷或玻璃絕緣子好。類的生長對絕緣體的壽命和電化學性能有影響，需要探討其機理和大小。
　　上所述，本研究初步確定了四川省雅安，廣安，巴中和南充變電站RTV涂層絕緣中藻類的分類狀況，從而豐富了該物種的多樣性。類生長在硅橡膠表面，并在中國其他地區的絕緣子上也探索了藻類。橡膠和藻類的生長與生長之間的關系提供了一些理論基礎。
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